النشاط الحشري وآثار التحكم الحيوي للفيروس متعدد النيوكليوبوليدروفيروس Autogra pha californica ((AcMNPV) على يرقات Spodoptera frugiperda

خلاصة

تعتبر دودة الحشد الخريفية Spodoptera frugiperda من أهم الآفات التي تصيب الذرة الصفراء والتي غزت الصين حديثاً. تمت دراسة وتحليل نشاط المبيدات الحشرية وتأثير المكافحة الحيوية لفيروس AcMNPV على S.frugiperda باستخدام طرق المقايسة الحيوية واختبار الفعالية الحقلية. وأظهرت النتائج أن متوسط ​​التركيز المميت (LC)₅₀) من AcMNPV يعمل على 2^{اختصار الثاني}كان عمر يرقات S.Frugiperda 2.9x 10⁷PIB/mL. متوسط ​​فعالية التحكم 10⁷PIB / مل تعليق AcMNPV + Bt (1500 مل / ساعة²) على S.frugiperda كان 68.99% على 10^ذيوم و 66.87% يوم 15^ذوأخيراً تم استخدام برنامج DNAMAN 6.0 للتعرف على تماثل الحمض النووي للحشرات الميتة، وأظهرت النتائج أن تسلسلات الجينات polh وlef-8 وlef-9 للحشرة الميتة وS．Frugiperda كانت 100 % متطابقة. جميع النتائج المذكورة أعلاه يمكن أن تؤكد أيضًا أن AcMNPV قد يلعب دورًا رئيسيًا في السيطرة على S．frugiperda．ويقترح أن 10⁷PIB/مل AcMNPV＋بت معلق (1500مل/ساعة²)يجب أن يتم تطبيقه في ذروة ظهور يرقات S.frugiperda الصغيرة، وبعد الساعة 4:00-5:00 مساءً في يوم مشمس لتجنب تأثير ارتفاع درجة الحرارة والضوء، حتى يكون إعداد الفيروس أفضل دوره وتحسين تأثيره المكافحة على S.frugiperda．

الكلمات الرئيسية: AcMNPV؛سبودوبتيرا فروجيبيردا؛حشرة حرشفية الأجنحة.يرقات.المبيدات الحيوية؛AcMNPV+ تعليق Bt;نشاط المبيدات الحشرية.الوقاية والسيطرة الخضراء

Spodoptera frugiperda هي آفة مهاجرة آكلة اللحوم دخلت الصين لأول مرة من ميانمار في عام 2019 وانتشرت بسرعة إلى 1518 منطقة في 26 مقاطعة وبلدية في الصين، مما يشكل تهديدًا خطيرًا للأمن الغذائي في الصين. حتى الآن، في استراتيجية مكافحة دودة الحشد، لا تزال السيطرة على تفشي دودة الحشد تعتمد على الاستخدام المكثف للمبيدات الحشرية الكيميائية.إن الإفراط في استخدام المبيدات الكيماوية يمكن أن يسبب بسهولة مقاومة الآفات وإعادة انتشارها والمخلفات البيئية والتلوث.أدت سلسلة من المشاكل الخطيرة إلى تقييد التنمية المستدامة للزراعة الحديثة بشكل خطير. ولذلك، تم استخدام طرق المكافحة البيولوجية أو استبدال المبيدات الحيوية.أصبح استخدام المبيدات الحشرية لمكافحة دودة الحشد أكثر أهمية وقد حظي باهتمام متزايد.

Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus AcMNPV هو فيروس متعدد التعرق النووي مضمن متعدد الحبوب معزول من يرقة Argyria alfalfa. يمكن أن يصيب أكثر من 30 نوعًا من الآفات الحرشفية مثل عثة البنجر، عثة الملفوف، Argyria argyra، و Calyptera teristoides. النوع المختلط مع Bt والمبيدات الحشرية الأخرى وفيروسات الآفات غير المستهدفة كعوامل متآزرة له تأثير تآزري واضح على العديد من الآفات الليلية، كما أنه يوسع نطاق المبيدات الحشرية ويحسن تأثير المبيدات الحشرية.AcMNPV هو مبيد حيوي جديد لفيروس الحشرات الذي طورته شركة Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD.وهو عبارة عن مزيج من فيروس تعدد التعرق النووي Argyria alfalfa وفيروس Bt القوي.مع نشاط جيد للمبيدات الحشرية، تم تطبيق A على نطاق واسع في الخضروات وأشجار الفاكهة والأرز وغيرها من المجالات.في هذا البحث، تم اكتشاف وتقييم نشاط المبيدات الحشرية وتأثير المكافحة الحيوية لفيروس Autographa californica mul-tiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) ضد Spodoptera frugiperda من خلال اختبار النشاط المختبري والتجربة الميدانية، من أجل توفير دعم البيانات للتطبيق الواسع لفيروس تعدد التعرق النووي في المكافحة البيولوجية لحشرة Spodoptera frugiperda في الذرة.يوفر أساسًا نظريًا لتسجيل وتطبيق عامل التعليق لـ AcMNPV plus Bt في مكافحة دودة الحشد.

1.المواد والأساليب

1.1اختبار الفيروسات والعوامل البيولوجية

كان الفيروس الذي تم اختباره هو Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) في 20 مايو 2019، تم جمع Spodoptera frugiperda من حقل الذرة في مدينة Xiantao، مقاطعة Hubei، وتم إجراء اختبار فحص العدوى بالفيروس في مختبر شركة Wuhan Unioasis Biological Technology Co. المحدودة.(حيث يكون لفيروس Autographa Californica multinucleopolyhedrovirus AcMNPV نشاط معدي عالي ضد Spodoptera frugiperda)، تم تربية يرقات Spodoptera frugiperda للتكاثر والتكاثر. تم طحن اليرقات الميتة المصابة بالفيروس بالماء، وتم ترشيحها من خلال 3 طبقات من الشاش، والترشيح تم الطرد المركزي عند 600 دورة / دقيقة و 300 دورة / دقيقة. وكان العدد الدقيق 1.8 × 10¹⁰متعددات الوجوه الخبيثة لكل مليلتر (Polyhedralinclusionbody PIB)، أي الحصول على درجة تقنية نقية من فيروس متعدد التعرق (1.8 × 10)¹⁰PIB/mL)، يحفظ في درجة حرارة منخفضة ويوضع جانباً.

كان العامل البيولوجي الذي تم اختباره هو Autographa california Nuclear polyhedrosis.Bacillus thuringiensis لـ AcNPV.Bt (1.0 × 107 PIB/mL).تم تطويره من قبل شركة Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD وتم إنتاجه من قبل شركة Wuhan Chuqiang Biological Technology Co., LTD التابعة لها.

1.2اختبار الحشرات

وكانت الحشرة التجريبية Spodoptera frugiperda.في 20 يوليو 2019، تم جمع يرقات Spodoptera frugiperda من حقل الذرة الصيفي في قرية Banqiao، بلدة Dachangzhen، مقاطعة Tongshan، مقاطعة Hubei، وإعادتها إلى مختبر معهد أبحاث حماية التربة والأسمدة التابع لأكاديمية Hubei الزراعية. العلوم. تم تغذية أوراق الذرة الطازجة والعطاء برأس واحد في أطباق بتري بلاستيكية يمكن التخلص منها (قطر 8 سم، ارتفاع 3 سم).كانت ظروف التغذية الداخلية هي:(25±1) درجة مئوية والرطوبة النسبية 60%-70%، وفترة الضوء هي 16L:8D.بعد عدة أجيال من التكاثر، يتم الاحتفاظ بكتل البيض الطازجة والمعقمة للاستخدام.

1.3النشاط المختبري لفيروس Autographa californica multi nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) ضد spodoptera frugiperda

ستة تدرجات تركيز، 1.0 ×10⁹، 1.0 ×10⁸، 1.0 ×10⁷، 1.0 ×10⁶، 1.0 ×10⁵، 1.0 ×10⁴تم تصميمها في هذه التجربة. أولاً، تم تخفيف TC لـ AcNPV إلى 1.0 ×10⁹PIB/mL، ثم تم تخفيفه 10 مرات للحصول على مواد مخففة أخرى بتركيزات مختلفة. تمت معالجة التجربة باستخدام التحكم الفارغ. تم إجراء إجمالي 7 عمليات، مع تكرار كل عملية 3 مرات.

تم اعتماد طريقة تغذية قطع الأوراق، أي أن أوراق الذرة الطازجة (طول 2 سم × عرض 2 سم) عولجت أولاً برذاذ معلق الفيروس، ثم تم تغذية اليرقات، وتم تغذية رأس واحد في أطباق بتري.كانت شرائط التغذية هي: درجة الحرارة (25 ± 1) درجة مئوية، المرحلة إلى الرطوبة (60٪ ~ 70٪)، الفترة الضوئية (16L: 8D). بعد تناول أوراق الذرة السامة، يجب إضافة أوراق الذرة الطازجة غير السامة على الفور. تمت معالجة 48 يرقات الطور الثاني لدودة الحشد بشكل متكرر. الجزء المرجعي 9{9-11}، مع الأخذ في الاعتبار التغيرات في تكاثر الفيروس في الخلايا ومضيفي عائلة العثة، وعدد الحشرات الميتة بسبب الفيروس و تم فحص العدد الإجمالي للحشرات الميتة بعد 7 و 10 أيام من الإصابة، وتم حساب معدل الوفيات وتم حساب LC50.

1.4اختبار ميداني لتأثير السيطرة على 10 مليون معلق AcMNPV.Bt على يرقات دودة الحشد

تم إجراء اختبار الفعالية الميدانية في حقل الذرة الصيفي في قرية شياويوان، مدينة تشوانغوانغ، مقاطعة تونغشان، مقاطعة هوبي.مساحة الاختبار 1500م^２ونوع التربة تربة كلسية، وقيمة الرقم الهيدروجيني 6.8، ومحتوى المادة العضوية 13.9%، والخصوبة متوسطة إلى عالية. وتزرع الذرة على مدار السنة، وصنف الذرة Xiyu رقم 3. يوم 13 يوليو ,2020 سماد مركب 45% 750 كجم//ساعة^２سيتم تطبيقها كسماد أساسي وزرعها.منذ عام 2019، حدث انتشار خطير لدودة الحشد الخريفية في هذا المجال.

ما مجموعه 10 مليون معلق AcMNPV.BT (1500 مل / ساعة²) و 15% بنزوات إيمامكتين. معلق إندوكارب (300 مل/ساعة)²)، تمت معالجة المبيدات الحشرية الشائعة الاستخدام والمكافحة الفارغة بثلاث معاملات.تم تكرار كل معاملة 4 مرات، بإجمالي 12 قطعة تجريبية، كل منها تغطي مساحة 100 متر مربع.²

بعد ظهر يوم 26 أغسطس 2020 (عندما تتكرر يرقات Spodoptera frugiperda)، قم برش المبيد الحشري مرة واحدة في المساء.يتم استخدام الرش الكهربائي متعدد الوظائف لحقيبة الظهر 3WBJ-16DZ من العلامة التجارية Lebang، مع ضغط تشغيل يبلغ 0.40~0.60 MPa، وقطر الفتحة 1mm، ومعدل التدفق 60~85L/h.يوم تطبيق المبيدات الحشرية مشمس، مع درجة حرارة 23-32 درجة مئوية.قم بإجراء الاستطلاعات في اليوم الأول والثالث والخامس والسابع والعاشر والخامس عشر بعد تقديم الطلب.أثناء التحقيق، تم أخذ 10 نقاط عينات عشوائية من كل قطعة، وتم مسح 10 نباتات بشكل مستمر في كل نقطة، بإجمالي 100 نبات.تم تسجيل عدد الحشرات الحية والوفيات والتسمم والأعداء الطبيعيين لكل نبات ذرة.صيغة الحساب ذات الصلة هي كما يلي؛

انخفاض معدل الحشرات = (عدد الحشرات الحية قبل التطبيق - عدد الحشرات الحية بعد التطبيق) / عدد الحشرات الحية قبل التطبيق

تأثير الوقاية والمكافحة=(انخفاض معدل الحشرة في منطقة المعالجة-انخفاض معدل الحشرة في منطقة المكافحة)/(100- انخفاض معدل الحشرة في منطقة المكافحة)*100%

1.5التحديد الجزيئي لـ ACMNPV

1) فحص عينات الفيروسات.حدد الخمور الأم ACMNPV لتحديد النشاط الداخلي (العينة 1)، والتحضير البيولوجي 10 مليون ACMNPV.Bt SC (العينة 2)، وجثث الحشرات المصابة بالفيروس بعد اختبار الفعالية الميدانية (العينة 3)، ويرقات الجيل الثاني من دودة الحشد المصابة بـ جثث الحشرات التي تم جمعها في العينة 3 (العينة 4) كعينات اختبار الفيروس، للتحقق مما إذا كان AcMNPV في 10 مليون ACMNPV.Bt له نشاط مبيد للجراثيم ضد يرقات دودة الحشد الخريفية.

2) استخراج الحمض النووي.خذ 1.0 مل من عينة AcMNPV، وأضف 99.0 مل من الماء المقطر، وحركها جيدًا لمدة دقيقة واحدة.خذ 300 ميكرولتر من التعليق بعد التذبذب، وأضف 100 ميكرولتر من محلول التكسير القلوي، وحمام مائي عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.أضف 200 ميكرولتر من محلول Tris·HCl العازل والطرد المركزي بسرعة 10000 دورة/دقيقة لمدة 8 دقائق.خذ المادة الطافية في أنبوب الطرد المركزي، أضف 5 ميكرولتر من بروتياز K و60 ميكرولتر من SDS، حمام مائي عند 65 درجة مئوية لمدة ساعتين، ثم قم بإزالته وتبريده إلى درجة حرارة الغرفة.إضافة 650μL مزيج L تريس الفينول المشبع جيدا، الطرد المركزي عند 10000 دورة / دقيقة لمدة 5 دقائق، واتخاذ المادة طافية في أنبوب الطرد المركزي الجديد.أضف 650 ميكرولتر من خليط الفينول والكلوروفورم (نسبة الحجم 1:1)، جهاز الطرد المركزي عند 10000 دورة/دقيقة لمدة 5 دقائق، ثم خذ المادة الطافية إلى أنبوب طرد مركزي جديد.أضف 650 ميكرولتر من السائل المختلط من الكلوروفورم وكحول الأيزواميل (نسبة الحجم 24:1)، وأجهزة الطرد المركزي عند 10000 دورة/دقيقة لمدة 5 دقائق، وأخيرًا خذ المادة الطافية إلى أنبوب طرد مركزي جديد.قياس تركيز الحمض النووي باستخدام مقياس الطيف الضوئي.

3) تضخيم PCR.باستخدام النظام القياسي T3 super mix: عينة DNA 2 μ L. 0.5μL الاشعال قبل وبعد، T3 super mix 18μL وddH₂O7μL.حالة تضخيم PCR هي 95 درجة مئوية.بعد 3 دقائق من التسخين المسبق، يتم تنفيذ الدورات التالية: 98 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، 52 درجة مئوية لمدة 20 ثانية، 72 درجة مئوية لمدة 20 ثانية، وأخيرًا 72 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، إجمالي دورة 42 مرة.

4) الترحيل الكهربي لهلام الاغاروز DNA.خذ منتج تضخيم PCR 2μL و5 كيلو بايت DNA Marker ووضعه في هلام الاغاروز، والكهربي عند 180 فولت لمدة 20 دقيقة.بعد التفريد، مراقبة منتجات PCR في نظام التصوير هلام.

Polh التمهيدي المنبع:

أججتتكككاجتكاكججكتجاج-جاتككتت

Polh التمهيدي المصب:

جاجكجاتاتتكاكاكتجتجتجتج-كااكتككت

Lef-8 التمهيدي المنبع:

أججتتكككاجتككاكجكاكججاات-جاك

الاشعال Lef-8 المتلقين للمعلومات:

جاجكجاتاتتكاكاتجتاكجاتكتتكجك

الاشعال Lef-9 المنبع

أججتتكككاجتكاكجااكجتاكككج

الاشعال Lef-9 المتلقين للمعلومات:

جاجكجاتاتتكاكاتجتكاككجتكاجتك

وأخيراً، قم بتطبيق برنامج DNAMAN6.0 لمقارنة تسلسلات polh المقاسة، وlef-8، وlef-9.

1.6تحليل ومعالجة البيانات

تمت معالجة البيانات التجريبية باستخدام برنامج التحليل الإحصائي للبيانات IBM SPSS 22.0.

في تجربة تحديد نشاط المبيدات الحشرية للفيروس، يتم حساب عدد الحشرات الميتة والحية المعالجة بكل تركيز، ويتم حساب معدل الوفيات والنسبة المئوية المعدلة للموتى، وتحويلها إلى قيم احتمالية.يتم تحويل تركيز كل علاج إلى قيم lg.يتم حساب معادلة انحدار الفوعة (المنحدر ± SE) من خلال قيم وأوزان احتمالات العمل، وLC₅₀القيمة وحد الثقة 95%، وأخيرًا إجراء اختبار مربع كاي (²).في تجربة تأثير المكافحة الحقلية، تم حساب عدد الحشرات الحية في كل معاملة، وحساب معدل تقليل الآفة.تم حساب تأثير التحكم باستخدام صيغة تحرير Microsoft Excel.تم استخدام طريقة دنكان للتحليل، وتم استخدام تحليل التباين الأحادي (ANOVA) لمقارنة الفروق المعنوية بين المعاملات،

تم إنشاء جميع المخططات الموجودة في النص باستخدام برنامج Microsoft Excel.

2.النتائج والتحليل

2.1نشاط المبيدات الحشرية لـ AcMNPV ضد يرقات Spodoptera frugiperda

تظهر نتائج اختبار النشاط الداخلي (الجدول 1) أنه بعد 7 أيام من العلاج، فإن LC₅₀من AcMNPV يعمل على يرقات الطور الثاني من Spodoptera frugiperda هو 4.1x10⁷PIB/مل، وLC₉₀هو 1.05x10⁸PIB/مل.بعد 10 أيام من العلاج، LC₅₀من AcMNPV يعمل على يرقات الطور الثاني هو 2.9x10⁷PIB/مل، وLC₉₀هو 7.8x10⁷PIB/مل.إل سي₅₀و إل سي₉₀كان تأثير AcMNPV على يرقات الطور الثاني لدودة الحشد الخريفية بعد 7 أيام من العلاج أعلى من 10 أيام، مما يشير إلى أن AcMNPV أظهر نشاطًا جيدًا للمبيدات الحشرية ضد يرقات Spodoptera frugiperda في 7 أيام.

2.2 تأثير التحكم الميداني لـ AcMNPV.يعمل Bt على يرقات Spodoptera frugiperda

وأظهرت نتائج تجارب الفعالية الميدانية أن 10 مليون AcMNPV.بت SC (1500 مل / ساعة²) كان له تأثير بطيء نسبيًا على يرقات spodoptera frugiperda.وكان متوسط ​​تأثير السيطرة في اليوم الأول والثالث والخامس بعد الرش 11.57%، 16.23%، و15.56% على التوالي.وكان متوسط ​​تأثير التحكم في اليوم السابع بعد الرش 21.88% فقط.ومع ذلك، في اليوم العاشر بعد الرش، ارتفع تأثير مكافحة الحشرات فجأة إلى 68.99%، وكان متوسط ​​تأثير المكافحة في اليوم الخامس عشر بعد الرش أيضًا 66.87%.ومع ذلك، بالمقارنة مع العوامل الكيميائية إيمامكتين بنزوات + إندوكساير مكيف بنسبة 15% (300 مل/ساعة)²)، كان له تأثير قتل جيد على يرقات spodoptera frugiperda، والتي يمكن أن تقلل بسرعة من عدد الحشرات.كان متوسط ​​تأثير التحكم في اليوم الأول والثالث والخامس والسابع بعد تناول الدواء 91.39% و92.66% و90.71% و87.19% على التوالي.ومع ذلك، بدأ متوسط ​​تأثير التحكم في اليوم العاشر في الانخفاض، فقط إلى 67.63%، وانخفض متوسط ​​تأثير التحكم في اليوم الخامس عشر إلى 51.60%.انظر الجدول 2 للحصول على التفاصيل.

وفي الوقت نفسه وجدنا أيضاً أن معدل انخفاض الحشرات في منطقة الشاهد كان سلبياً في اليوم الأول والثالث والخامس بعد المعالجة، مما يشير إلى زيادة في عدد الحشرات.في اليوم السابع بعد العلاج، بدأت تصبح إيجابية (بدأ عدد الحشرات في الانخفاض).بلغ متوسط ​​معدل انخفاض الحشرة في اليومين العاشر والخامس عشر 38.25% و47.00% على التوالي، وهو أمر من المحتمل جدًا أن يرتبط بحقيقة أن بعض يرقات spodoptera frugiperda بدأت بالتشرنق في التربة وتداخلت الأجيال بعد 10-15 يومًا. .

وباختصار، يمكن ملاحظة أن 10 مليون AcMNPV.بت SC (1500 مل / ساعة²) له تأثير تحكم معين على spodoptera frugiperda، لكن تأثيره بطيء، وفعاليته حوالي 10-15 يومًا بعد الاستخدام.

2.3 آثار AcMNPV.Bt على الأعداء الطبيعيين

خلال التجارب الميدانية، تم اكتشاف تأثيرات 10 مليون AcMNPV.كما تمت دراسة تأثير معلق Bt على الأعداء الطبيعيين للآفات على الذرة مثل العناكب والخنافس والخنافس.وأظهرت النتائج أن 10 مليون AcMNPV.ولم يكن للتعليق Bt أضرار كبيرة على الأعداء الطبيعيين مثل العناكب والخنافس والخنافس، حيث بلغ متوسط ​​الأعداء الطبيعيين 13.4 لكل 100 نبات.ومع ذلك، كان للعوامل الكيميائية Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% Suspension تأثير سام كبير على الأعداء الطبيعيين مثل العناكب والخنافس والخنافس.في اليوم الأول بعد العلاج، كان متوسط ​​عدد الأعداء الطبيعيين في 100 نبات من الذرة 3.1 فقط، وفي اليوم الثالث بعد العلاج، تم العثور على 5.2 فقط من الأعداء الطبيعيين من مختلف الأنواع (الشكل 1).ويمكن ملاحظة أن 10 ملايين AcMNPV.معلق Bt له تأثير وقائي جيد على الأعداء الطبيعيين للآفات، بينما يسبب معلق Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% ضررًا أكبر نسبيًا للأعداء الطبيعيين.

2.4 التحديد الجزيئي لـ AcMNPV

أظهرت نتائج تضخيم PCR لعينات اختبار مختلفة أن أجزاء التضخيم من polh وlef-8 وlef-9 للعينات 1 و2 و3 و4 كانت متسقة وصحيحة في الحجم.كانت منتجات PCR لجينات polh وlef-8 وlef-9 0.54 و0.716 و0.29 كيلو بايت، على التوالي (الشكل 2)، مما يثبت أن AcMNPV له نشاط مبيد حشري ضد يرقات spodoptera frugiperda.

وأخيراً، تم استخدام برنامج DNAMAN 6.0 لإجراء محاذاة التسلسل على الأجزاء المضخمة من polh وlef-8 وle.f-9 في العينات 1 و2 و3 و4 (الشكل 3).أظهرت النتائج أن التشابه بين التسلسلات المضخمة لـ polh وlef-8 وlef-9 في العينات 1 و2 و3 و4 كان بنسبة 100%، مما يشير إلى أن العينات 1 و2 و3 و4 جميعها تنشأ من نفس الفيروس AcMNPV.

3. المناقشة

AcMNPV هو فيروس على شكل قضيب حشري يصيب جسم الحشرات من خلال التغذية.ويتكاثر الفيروس وينتشر في جميع أنحاء جسم الحشرة، ويصيب الجسم بأكمله تدريجيًا ويؤدي في النهاية إلى الوفاة.تشير نتائج هذه الدراسة إلى أن AcMNPV له نشاط بيولوجي جيد ضد يرقات Spodoptera frugiperda.وكان التركيز المميت في اليومين السابع والعاشر 4.1x107 و2.9x107PIB/m على التوالي، وأظهر تأثيرات تحكم جيدة في الميدان.التعليق المختلط لـ 10 مليون AcMNPV.Bt (1500 مل/ساعة²) كانت تأثيرات السيطرة متوسطة جيدة في اليومين العاشر والخامس عشر بعد العلاج، حيث وصلت إلى 68.99% و66.87% على التوالي، وكانت آمنة للأعداء الطبيعيين.ولذلك، ينبغي تسريع وتيرة البحث والتطوير حتى يتمكن AcMNPV من لعب دور أكبر في المكافحة البيولوجية لحشرة Spodoptera frugiperda.إن معلق 10 ملايين AcMNPV.Bt الذي تنتجه شركة Wuhan Chuqiang Biotechnology Co., Ltd. هو مركب من AcMNPV والمبيد الحيوي Bacillus thuringiensis (Bt)، والذي يمكن أن يحسن بشكل كبير نشاط المبيدات الحشرية للفيروس.نظرًا لأن Bt مبيد حشري واسع النطاق ذو نشاط مبيد حشري ميكروبي جيد، فعندما يتم دمج AcMNPV مع Bt، يجب أن تتحسن سميته بشكل ملحوظ مقارنة بتركيبة واحدة.وهذا لا يؤدي إلى توسيع نطاق المبيدات الحشرية لـ Bt فحسب، بل يعزز أيضًا سميتها، مما يحقق هدف استخدام تركيبة واحدة للسيطرة على آفات متعددة.وهذا هو السبب أيضًا وراء إمكانية الترويج على نطاق واسع لتعليق 10 ملايين AcMNPV.Bt في الخضروات وأشجار الفاكهة والأرز.لذلك، يمكن تعزيز 10 مليون AcMNPV.Bt كعامل مكافحة أخضر لطفيلي Spodoptera frugiperda في الذرة

في هذه الدراسة، عند إجراء اختبارات الفعالية الحقلية، في حالة الانخفاض السريع في أعداد الحشرات في منطقة المكافحة (وصل معدل انخفاض الحشرة في اليوم الخامس عشر إلى 47.00%)، بلغ متوسط ​​تأثير المكافحة 10 مليون AcMNPV.Bt معلق (1500مل/ساعة²) في اليوم الخامس عشر بعد العلاج كان 66.87%، مما يدل على اتجاه تصاعدي سريع.في حين بلغ متوسط ​​تأثير المكافحة للمبيد الكيميائي 15% ميثوكسازول · إنديفينكارب SC (300 مل/ساعة)²) في اليوم الخامس عشر بعد العلاج انخفضت إلى 51.60%.على الرغم من أنه يمكن ملاحظة أن تعليق 10 ملايين AcMNPV.Bt (1500 مل / ساعة²) له تأثير تحكم معين على Spodoptera frugiperda في اليوم العاشر إلى الخامس عشر، مع الأخذ في الاعتبار الفعالية البطيئة للمبيدات البيولوجية والعمر القصير والأجيال المتداخلة ليرقات Spodoptera frugiperda، يوصى بزيادة عدد التحقيقات وتمديد وقت التحقيق عندما إجراء تجارب الفعالية الحقلية للمبيدات البيولوجية (وخاصة المستحضرات الفيروسية)، والتي قد تحقق نتائج تجريبية أكثر مثالية.وهذا هو أيضا الحد من هذه الدراسة.باختصار، بالمقارنة مع العوامل البيولوجية، فإن العوامل الكيميائية لها تأثير قتل أعلى نسبيًا على الآفات وتصبح سارية المفعول بسرعة.ويمكن استخدامها كإجراء للوقاية من حالات الطوارئ ومكافحتها أثناء تفشي الآفات.عندما تحدث أضرار الآفات بشكل طفيف نسبيا، يمكن للمبيدات البيولوجية أن تحل محل المبيدات الكيميائية كأحد تدابير الوقاية والسيطرة الخضراء، وبالتالي تقليل التلوث البيئي وتحقيق تأثير حماية البيئة الزراعية.

بالإضافة إلى ذلك، فإن جين Polh (متعدد السطوح) المستخدم في هذه الدراسة هو نوع من مروج البروتين متعدد السطوح، وهو وP10 هما المروج الأكثر استخدامًا في نظام ناقل تعبير فيروس البكالوريا (BEVS)، وكلاهما يتم التعبير عنهما بشكل كبير في المرحلة المتأخرة. من العدوى الفيروسية^[13].ومع ذلك، فإن نشاط مروج p10 أقل من نشاط مروج polh، لذلك غالبًا ما يستخدم مروج polh للتعبير عن البروتينات الخارجية.يمكن لجين lef-8 تشفير أكبر وحدة فرعية من بوليميراز الحمض النووي الريبوزي الخاص بالفيروس، وهو نوع من عوامل التعبير المتأخر^[14].lef-9 هو نوع من عوامل التعبير المتأخرة التي تشارك في تشفير الوحدة الفرعية المعقدة للبروتين مع lef-4 وlef-8 وp47 في الفيروسات العصوية.وقد وجدت الأبحاث أن الفيروسات التي تفتقر إلى جين lef-9 لا يمكنها توليد جزيئات فيروسية ذات نشاط معدي، بينما يمكن للفيروسات التي تحتوي على جين lef-9 استعادة النشاط المعدي للفيروس عن طريق استعادته.ولذلك، فإن جين lef-9 هو جين أساسي لفيروس البكتيريا لتكوين BV (فيروس براعم) ذو نشاط معدي^[15].ويمكن ملاحظة أن جينات lef-8 وlef-9 تتمتع بمحافظة عالية في أنواع مختلفة من فيروسات تعدد التعرق النووي، لذلك يمكن استخدام جينات lef-8 وlef-9 كأساس لتحديد أنواع الفيروسات.ولذلك، استخدمت هذه الدراسة polh، وlef-8، وlef-9 ككائنات الكشف، ومن خلال محاذاة تسلسل الجينات، كان التماثل مرتفعًا، حيث وصل جميعها إلى 100٪.أثبتت طريقة الكشف الجزيئي السريع مرة أخرى أن AcMNPV له نشاط مبيد حشري جيد ضد Spodoptera frugiperda، وهو مناسب لمزيد من الترويج والتطبيق في الوقاية من Spodoptera frugiperda ومكافحتها.

منذ عام 2019، غزت حشرة Spodoptera frugiperda الصين وأصبحت آفة مهمة للذرة.وقد شكلت تجمعات سكانية مستقرة في بعض مناطق جنوب وجنوب غرب الصين، مما تسبب في خسائر فادحة لصناعة الذرة في الصين وتهديد الأمن الغذائي في الصين بشكل خطير.^[16].في مواجهة الوضع الخطير الحالي للوقاية من حشرة Spodoptera frugiperda ومكافحتها في الصين، فمن الملح تسريع عملية فحص وتطوير مبيدات حشرية فعالة للوقاية من حشرة Spodoptera frugiperda ومكافحتها.^[17].على الرغم من أن المبيدات الحشرية الفيروسية قد حدت من تطبيقها على نطاق واسع بسبب بطء معدل عملها وضيق نطاق المبيدات الحشرية، في سياق الاهتمام المتزايد بالبيئة وحماية البيئة، من المتوقع أن يتم استخدام المبيدات الحشرية الفيروسية البكالية على نطاق واسع بشكل متزايد في الإنتاج الزراعي بسبب مزاياها الكبيرة مقارنة بالمبيدات الحشرية الفيروسية. المبيدات الحشرية التقليدية.بسبب قابلية مستحضرات فيروسات الحشرات للظروف الخارجية مثل ارتفاع درجة الحرارة، وأشعة الشمس، والأمطار، وعمر الآفات[18].ولذلك ينصح باستخدام المبيدات الحشرية خلال فترة ذروة تواجد يرقات الآفات.من الأفضل استخدامه بعد الساعة 4:00-5:00 مساءً في الأيام المشمسة لتجنب تأثير الظروف البيئية المعاكسة مثل ارتفاع درجة الحرارة والضوء، حتى تتمكن تركيبة الفيروس من لعب دورها بشكل أفضل وتحسين تأثير المكافحة على الآفات. .